高效液相色谱仪 色谱仪应用 液相色谱仪方法

              高效液相色谱测定纺织品中偶氮的含量

1.1　仪器与试剂

梯度液相色谱仪, 配紫外检测器；

超声波水浴(4 kHz)；

真空旋转蒸发仪；

恒温控制水浴(精度±2 ℃) 。

提取柱：20cm*2.5cm玻璃柱或聚丙烯柱，能控制流速，填装时，先在底部垫少许玻璃棉，然后加入20克多空颗粒状硅藻土（600度灼烧4h），轻击提取柱使填装结实；

芳香胺标准品(纯度均大于98% )；

甲基叔丁醚；二氯甲烷。

1.2　溶液的配制

0.06 mol/L的柠檬酸盐缓冲液(pH 6.0)：取12.526柠檬酸和6.320克氢氧化钠溶于水中，用水定容至1000mL；200 g/L连二亚硫酸钠溶液(用时现配)；

芳香胺混合标准储备液: 分别称取21种芳香胺标准品, 用二氯甲烷配成1000mg/L的混合标准储备液, 低温保存, 备用；

芳香胺标准工作液: 用甲醇将混合标准储备液稀释成60、30、15 mg/L的标准工作溶液, 低温保存, 备用。

1.3　液相色谱条件

色谱柱:  C18柱，250mm x 4.6 mm，5μm； 

柱温:室温；

流动相A: 甲醇；

流动相B: 0.575 g磷酸二氢铵与0.7 g磷酸氢二钠溶于1 000 mL水中, pH 6.0；

 梯度洗脱:

  0～25 min, 流动相A由5%线性变化至55%；

  25～40 min, 流动相A由55%线性变化至80%；

流速1.0 mL /min;

进样体积20μL；

检测波长240 nm。

1.4　样品前处理

1.4.1 提取

    将样品剪成5mm*5mm的小片，混合。从混合样中称取2.0克，精确至0.01克，置于50ml离心管中入17.0ml稳定为70度左右的柠檬酸缓冲溶液中，并在70度（正负2度）水浴30min。再加入3.0ml连二亚硫酸钠溶液，盖上盖子摇匀，置于70度（正负2度）水浴中保持30min。取出后于2min内冷却至室温。

1.4.2 净化

    用玻璃棒挤压反应器中的试样，将反应液全部倒入提取柱内，任其吸附15min,用40ml甲基叔丁基醚分三次洗离心管内的试样，然后将甲基叔丁基醚洗液倒入提取柱中，控制流速，收集甲基叔丁基醚提取液于100ml比色管中。

1.4.3 浓缩

将上比色管置于真空旋转蒸发仪上，于35度左右的低真空下浓缩至1-2ml，再用氮气吹至近干，用甲醇定容至1ml，过0.45μm 有机相滤头，立即进行液相色谱分析。

2　结果

用此方法测定纺织品中的偶氮含量，较为省时且易于操作。除3, 3′-二甲基联苯胺和4, 4′2 二氨基二苯硫醚色谱峰(图1A中10、11号峰)重叠, 2, 6二甲基苯胺和2, 4二甲基苯胺(图1中13、14号峰)有少于重叠外，其它化合物均取得了很好的分离效果。以pH 6.0的柠檬酸盐缓冲溶液模拟人体的汗液环境, 分别加入7.5、15、30 mg/L 3个水平的芳香胺标准品进行回收实验, 每一水平分别做6个平行样品, 相对标准偏差和平均回收率数据见表1。应用高效液相色谱法分离检测了23种混合芳香胺, 取得了很好的分离效果, 满足了国内外相关标准及法规的新要求。

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