饲料中维生素B1、B2、B6的测定

1  仪器及试剂

仪器
　  1). 分析天平一台（精度0.1mg）；

2). 超声波清洗机一台；

3). 溶剂过滤器（含泵）一套；

4). 微量进样器（100μl）一支；

5).等度高效液相色谱仪；

试剂
　 1). 乙二胺四乙酸二钠（EDTA）；
　 2). 庚烷磺酸钠，优级纯；

3). 冰乙酸，优级纯；
　 4). 三乙胺，色谱纯；
　 5). 甲醇，色谱纯；

6). 维生素B2标准品：含量≥99%；

7). 维生素B2标准贮备液；
　 8). 维生素B2标准工作液；

提取液：在已装入约700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mgEDTA，待完全溶解后，加入25ml冰乙酸，5ml三乙胺，用去离子水定容到刻度摇匀。

流动相：在已装入700ml去离子水的1000ml容量瓶中，加入50mgEDTA、1.1g庚烷磺酸钠，待全溶解后，加入25ml冰乙酸、5ml三乙胺，用去离子水定容至刻度摇匀。用冰乙酸、三乙胺调解pH至3.4±0.02，过0.45μm滤膜，取该溶液860ml与140ml甲醇混合，超声脱气，待用。

2  试样溶液的制备
　　称取维生素预混合饲料0.25g-0.5g，于100ml棕色容量瓶中，加入三分之二的提取液于80-100℃水浴中煮沸30min，待冷却后加入14ml甲醇，用提取液定容至刻度，混匀，过滤。维生素预混合饲料样液需由提取液进一步稀释5倍-10倍，取部分过滤液过0.45μm滤膜过滤，高效液相色谱仪分析。

3  色谱条件
　　色谱柱：C18 色谱柱　150mm×4.6mm×5μm；
　　流速：1.0mlmin；
　　温度：室温；
　　进样量：20μl
　　检测波长：单检维生素B2为267nm，多种维生素联检为280nm。

4  色谱图

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